{"id":675,"date":"2022-02-20T21:19:51","date_gmt":"2022-02-20T20:19:51","guid":{"rendered":"https:\/\/pedagogie.ac-lille.fr\/svt\/?p=675"},"modified":"2022-02-20T21:21:22","modified_gmt":"2022-02-20T20:21:22","slug":"influence-des-conditions-de-culture-sur-le-phenotype-dune-levure-ade-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/pedagogie.ac-lille.fr\/svt\/influence-des-conditions-de-culture-sur-le-phenotype-dune-levure-ade-2\/","title":{"rendered":"Influence des conditions de culture sur le ph\u00e9notype d’une levure Ade 2"},"content":{"rendered":"

Objectif de la manipulation<\/h2>\n
Montrer que l\u2019effet des all\u00e8les d\u2019un g\u00e8ne va d\u00e9pendre \u00e9galement de l\u2019environnement.<\/div>\n
<\/div>\n
\n

Principe de la manipulation<\/h2>\n

Placer des Levures Ade2 de couleur rouge dans un milieu pauvre en dioxyg\u00e8ne.<\/p>\n<\/div>\n

Mat\u00e9riel<\/h2>\n

– Souche Ade2 de couleur rouge et bo\u00eetes de P\u00e9tri st\u00e9rilis\u00e9es renfermant une g\u00e9lose nutritive sp\u00e9cifique (cf. TP Seconde \u2013 Kit mutagen\u00e8se de Sordalab)<\/p>\n

– Chiffon imbib\u00e9 d\u2019eau de Javel et savon<\/div>\n
– Bec Bunsen ou bec \u00e9lectrique<\/div>\n
– Tubes et pipettes st\u00e9riles n\u00e9cessaires \u00e0 la dilution<\/div>\n
– Scalpel et \u00f6se st\u00e9rilis\u00e9s<\/div>\n
– Etuve<\/div>\n
<\/div>\n
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R\u00e9alisation technique<\/strong><\/h2>\n
A pr\u00e9parer avant la s\u00e9ance\u00a0:<\/div>\n

–\u00a0Pr\u00e9l\u00e8vement de Levures Ade2<\/p>\n

–\u00a0Mise en solution en milieu st\u00e9rile<\/p>\n

–\u00a0Comptage sur cellule de Malassez ou lame de Kova<\/p>\n

– Correction de la concentration par dilution (cf. fiche technique fournie par Sordalab)<\/p>\n

Lors de la premi\u00e8re s\u00e9ance\u00a0:<\/div>\n

–\u00a0Ensemencer une bo\u00eete de P\u00e9tri en milieu st\u00e9rile avec la suspension de Levure Ade2 pr\u00e9par\u00e9e par l\u2019enseignant<\/p>\n

–\u00a0D\u00e9couper, pr\u00e8s du bec, un carr\u00e9 de g\u00e9lose \u00e0 l\u2019aide du scalpel st\u00e9rile dans la bo\u00eete ensemenc\u00e9e (ou dans une autre bo\u00eete st\u00e9rile).<\/p>\n

–\u00a0Toujours pr\u00e8s du bec, basculer \u00e0 l\u2019aide du scalpel le carr\u00e9 d\u00e9coup\u00e9 sur le reste de la g\u00e9lose puis appuyer d\u00e9licatement sur ce carr\u00e9 pour assurer un bon contact avec la surface du milieu<\/p>\n

–\u00a0Mettre en culture 7 jours \u00e0 28\u00b0C<\/p>\n

Lors de la deuxi\u00e8me s\u00e9ance :<\/div>\n

–\u00a0Observer les colonies de Levures sous la g\u00e9lose (manque d\u2019O2<\/sub>) et les colonies \u00e0 la surface du milieu laiss\u00e9 \u00e0 l\u2019air libre (t\u00e9moin).<\/p>\n

–\u00a0Retourner la bo\u00eete et marquer en pointill\u00e9s l\u2019emplacement du carr\u00e9 de g\u00e9lose. Enlever ensuite d\u00e9licatement le carr\u00e9 de g\u00e9lose et observer dans les heures qui suivent.<\/p>\n

R\u00e9sultats<\/h2>\n

Les Levures Ade2 plac\u00e9es en a\u00e9robiose apparaissent rouges, car l\u2019AIR (phosphoribosyl aminoimidazole) accumul\u00e9 suite \u00e0 l’interruption de la cha\u00eene de biosynth\u00e8se de l’ad\u00e9nine est oxyd\u00e9 en un pigment rouge.<\/p>\n

Sous la g\u00e9lose plac\u00e9e sur le milieu, il y a un manque de dioxyg\u00e8ne surtout dans les zones o\u00f9 le contact est \u00e9troit : l\u2019AIR form\u00e9 dans les levures Ade2 n\u2019est plus totalement oxyd\u00e9, celles-ci pr\u00e9sentent alors un ph\u00e9notype original : une couleur rose.<\/p>\n

En retournant la bo\u00eete de P\u00e9tri, vous pourrez \u00e9galement observer cette couleur rose pour les Levures situ\u00e9es \u00e0 la base des autres colonies Ade2, l\u00e0 o\u00f9 r\u00e8gne un d\u00e9ficit en dioxyg\u00e8ne.<\/p>\n

Lorsque le carr\u00e9 de g\u00e9lose est enlev\u00e9, les colonies roses sont plac\u00e9es en a\u00e9robiose et prennent alors une coloration rouge\u00e2tre dans les heures qui suivent.<\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

Remarques et astuces<\/h2>\n

– L\u2019obtention d\u2019une ana\u00e9robiose parfaite est difficilement r\u00e9alisable. Dans ce cas, elle aboutit \u00e0 une absence totale d\u2019oxydation de l\u2019AIR en pigment rouge : les colonies sont alors de couleur cr\u00e8me. Outre cette difficult\u00e9, il y a un risque de confusion pour les \u00e9l\u00e8ves entre ces Levures Ade2 en ana\u00e9robiose et les r\u00e9vertants Ade2 ayant subi une mutation spontan\u00e9e. Il est donc pr\u00e9f\u00e9rable de ne consid\u00e9rer que les colonies roses.<\/p>\n

– Le pr\u00e9l\u00e8vement du carr\u00e9 de g\u00e9lose dans une bo\u00eete non ensemenc\u00e9e puis son d\u00e9p\u00f4t dans la bo\u00eete ensemenc\u00e9e donnent un r\u00e9sultat plus \u00ab esth\u00e9tique \u00bb, mais constituent des op\u00e9rations beaucoup plus d\u00e9licates pour l\u2019\u00e9l\u00e8ve.<\/p>\n<\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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